Хронические вирусные инфекции кошек. Пцр-диагностика вирусных и бактериальных инфекций домашних животных

I. Какие анализы надо сдать подобранной на улице кошке или коту?

Строго говоря, назначать исследования должен лечащий врач в зависимости от состояния животного, но грамотный специалист все равно назначит какую-нибудь комбинацию из списка, приведенного ниже. Сдавать анализы я рекомендую даже совершенно здоровым на вид животным. Почему, станет ясно по ходу прочтения этой статьи. А вот у котят до 2-х месяцев брать кровь на анализы, в том числе для проверки на инфекции нет смысла.

Расположим анализы по приоритету:

1. На панлейкопению (методом ПЦР).
2. На вялотекущие вирусные инфекции (методом ПЦР).
3. Общеклинический анализ крови (перед сдачей требуется голодание 4 часа)
4. Биохимический анализ крови (перед сдачей требуется голодание 8-12 часов).
5. Анализ мочи. (общеклинический, а также соотношение белок-креатинин).

Рассмотрим подробнее:

1. Панлейкопения или чума кошек (парвовирусная инфекция). Самое заразное и смертоносное заболевание кошек. Не передается людям и другим видам животных. При отсутствии лечения часто приводит к смерти, особенно котят. Вакцинация импортным препаратом, ежегодно проводимая по всем правилам (с двойной дегельминтизацией) эффективно защищает от этой болезни. Поэтому, если у Вас дома есть непривитые кошки, то анализ крайне важен. Но даже если у Вас дома нет других кошек или они привиты — я все равно настоятельно рекомендую сдать этот анализ.

Даже совершенно здоровое на вид животное может быть носителем этого опаснейшего вируса (инкубационный период составляет от 4-х до 21 дня) и если анализ обнаружит вирус, врачи смогут предпринять соответствующие меры, чтобы смягчить протекание болезни. Пока результат не получен, рекомендую соблюдать .

1. Анализы на вялотекущие инфекции. Наиболее распространены 4 инфекции: вирусный лейкоз кошек, иммунодефицит кошек, вирусный перитонит кошек (ФИП) и коронавирус (вирусный энтерит). Не передаются человеку и другим видам животных. Сдача анализов крайне необходима, если у вас есть свои кошки (причем неважно, привиты они или нет, т.к. эффективных прививок от этих вирусов не существует). Если других кошек в квартире нет, то все равно желательно знать о наличии вируса в теле животного т.к. эти инфекции могут “дремать” годами без каких-либо видимых проявлений, но активизироваться в случае стрессового воздействия на организм (от сильного глистогонного препарата до наркоза при операции) и перейти в острую стадию. Эффективного лечения лейкоза, иммунодефицита и ФИП в острой стадии нет. Существует поддерживающая терапия, но и она не всегда эффективна. Пока результат не получен, рекомендую соблюдать .

Стоимость анализа методом ПЦР (рекомендую только этот метод) 300-600руб без учета стоимости забора крови за каждый (мазка из прямой кишки), в зависимости от лаборатории или клиники. Результат через 1-3 суток, также в зависимости от лаборатории. Некоторые лаборатории объединяют эти анализы в один т.н. профиль, что дает возможность сэкономить деньги. Например, лаборатория Нуклеом, через ветклинику Зооакадемия, предоставляет возможность сдать анализы на вялотекущие инфекции методом ПЦР в составе профиля за 900руб (причем туда НЕ входит, коронавирус, который рекомендуется сдать дополнительно за 300р, зато включена панлейкопения (!) и добавлен гемобартонеллез). На сегодняшний день, это самое выгодное из известных мне предложений по Москве. В других лабораториях и ветклиниках подобное исследование может обойтись в 2 раза дороже.

1. Общеклинический анализ крови. Перед сдачей необходимо голодание 4 часа. Очень информативен для врачей. Расскажет об острых состояниях, например, о воспалительных процессах в организме, и поможет врачу правильно подобрать препараты для лечения, если возникнет необходимость. Подтвердить или опровергнуть результаты исследований №1-2. При этом стоит недорого 300-600руб (без учета стоимости забора крови), поэтому строго рекомендуется к сдаче, при любом заборе крови, например, для исследований №1-2.

1. Биохимическое исследование крови. Перед сдачей необходимо голодание 8-12 часов. Покажет состояние внутренних органов и поможет врачу назначить правильное лечение при необходимости. Также как и исследование №3 анализ может помочь в подтверждении результатов исследований №2. Представляет собой набор показателей, поэтому стоимость варьируется в зависимости от их количества и от лаборатории. Как правило, нет необходимости ломать голову на тему, какие показатели сдавать т.к. любая лаборатория объединяет их в специальные профили. Можно сдать стандартный или расширенный. Стоимость варьируется в зависимости от клиники и лаборатории. Стандартный профиль стоит от 900р, расширенный от 1 200р без учета стоимости забора крови.

Важное замечание. Нет смысла сдавать биохимию крови: а) беременным, б) котятам до 4-х месяцев, в) ранее одного месяца после операции с наркозом! Результат будет сильно искажен и может ввести в заблуждение врача, который назначит ненужное лечение.

1. Анализ мочи. 5.1. Общеклинический. 5.2. Соотношение белок/креатинин.

Самое сложное по части получения материала исследование. Зато для его сбора не надо вести животное в клинику. Очень важное исследование, которое может выявить на ранней стадии проблемы с почками или признаки мочекаменной болезни, чего никогда не сможет показать исследование №3. В то же время в нем нет такой срочности, как в исследованиях №1-3. Мочу необходимо собирать в чистый(!) лоток. Можно использовать специальный набор для сбора мочи (стоимость 300-400р), представляющий собой гранулы, не впитывающие жидкость, и контейнер для мочи. Для сбора мочи из лотка также можно использовать обычный шприц (20 мл) без иглы. Транспортировать в лабораторию или ветклинику можно также в нем. Необходимые соблюдать некоторые условия. Анализ не должен храниться более 5-ти часов с момента сбора до момента помещения в лабораторное оборудование. Храниться и транспортироваться он должен в холоде. При транспортировке рекомендую использовать термопакет и хладогент. Если у Вас нет хладогента, то можно использовать замороженные овощи J. Средняя стоимость — около 600р.

II. Где сдавать анализы?

А) Можно в клинике, совместив с первичным приемом врача. В любом случае Вам придется идти к врачу с результатами анализов, т.к. интерпретация анализов №3-5 требует врачебной квалификации.

Б) Напрямую в специализированных лабораториях. В этом случае Вам придется самим решать что сдавать, а что нет.

При этом, многие ветклиники имеют собственные лаборатории, способные проводить исследования №3-5, в то время как исследования на вирусы требуют более дорогостоящего оборудования, поэтому клиники, не имея его, отправляют забранный материал в специализированные лаборатории, с которыми они сотрудничают. Наиболее известные лаборатории в Москве (по алфавиту): Веттест, Неовет, Нуклеом, Пастер, ЦМД (звенигородское шоссе), Шанс био (сеть). С какими лабораториями сотрудничает конкретная ветклиника (желательно, чтобы их было более одной), а также стоимость анализов рекомендую узнавать заранее. Как правило, во всех лабораториях имеется высококачественное оборудование, но качество полученных результатов, к сожалению, сильно зависит от человеческого фактора. Так что это в какой-то степени лотерея, и порой приходится пересдавать анализы в разных лабораториях, чтобы подтвердить или опровергнуть тот или иной результат.

О правилах читайте в отдельной статье.

Коронавирус широко распространен в популяции домашних кошек, поэтому ветеринарные врачи часто сталкиваются с тремя типами отношения хозяев зараженных коронавирусом зверей к своим питомцам:

2) при наличии симптомов заболевания и при положительных анализах на коронавирус одновременно люди (как правило опытные пользователи Интернета, старожилы кошачьих форумов) говорят «ай, фигня, это же всего-лишь безобидный коронавирус, зачем его лечить и ходить с этим к врачу, не обращайте внимание и оно само пройдёт»

3) лечить, лечить и ещё раз лечить! Многим тяжело принять то, что с некоторыми заболеваниями подавляющее большинство кошек прекрасно справляются самостоятельно. Есть болезнь - значит необходимо ее лечить, и пошло-поехало - уколы, таблетки, пересдача анализов раз в неделю…

Как бы грустно ни было это признавать, но и среди людей, связанных с кошками профессионально - ветеринарных врачей и заводчиков, можно нарваться на радикальные взгляды в сторону коронавируса.
Иногда приходится видеть рекомендации к эвтаназии животного, у которого аж коронавирус (как правило, усыпление пациента мотивировали тем, что коронавирус может мутировать в FIP - вирус инфекционного перитонита кошек),
или слышать от заводчиков «да этот коронавирус есть вообще во всех питомниках, поэтому мы на него не проверяем, попробуйте поищите питомник без коронавируса - не найдёте».

Все описанные выше крайности в отношении к коронавирусу у кошек - ошибочны и основаны на безграмотности в теме заболевания. Владельцы кошек не виноваты в этом, они не обязаны иметь образование ветеринарного врача и знать всё обо всех болезнях.
Но иногда отсутствие адекватной информации под рукой вовремя может привести к самым печальным последствиям - к серьёзному заболеванию или даже к гибели животного.
Коронавирус у кошек - это не приговор, не «страшное, неизлечимое, смертельное», но и не пустяк, о котором можно вообще забыть. Это инфекционная болезнь со своими особенностями течения, о которых необходимо знать, чтобы принимать грамотные действия своевременно и качественно заботиться о своём питомце.

Поэтому сегодня мы решили рассказать Вам о коронавирусе - просто.

ПАТОФИЗИОЛОГИЯ

Вирус проникает в организм через ротоглотку, достигает желудочно-кишечного тракта и вызывает воспалительный процесс слизистой оболочки тонкого отдела кишечника (живёт в клетках кишечного эпителия и разрушает их).
Иммунитет кошки работает над выведением вируса и большинство животных побеждают инфекцию самостоятельно. Процесс естественного выведения коронавируса из организма может занимать от нескольких недель до нескольких месяцев.
Если большое количество кошек живут скученно, то они могут перезаражать коронавирусом друг друга снова и снова.
Небольшой процент кошек могут остаться носителями коронавируса навсегда (13% инфицированных).

ПЕРЕДАЧА ВИРУСА

Коронавирус в большом количестве (миллиарды вирусных частиц на 1 грамм кала) выделяется с фекалиями инфицированных. Заражение происходит, когда кошки глотают или вдыхают вирус.
Заразность коронавируса очень высокая, для распространения достаточно небольшой частицы наполнителя из лотка, которым пользовалась выделяющая вирус кошка.

Кошачий коронавирус хорошо себя чувствует во внешней среде и может оставаться жизнеспособным на поверхностях в течение 7 недель.

По разным исследованиями от 60 до 80% всех кошек планеты заражены коронавирусом или когда-то контактировали с ним.

Риск передачи коронавируса через прикосновения рук, одежду или животных других видов невелик, только если руки/одежда/другое животное будут загрязнены непосредственно калом выделяющего вирус кота.

FIP - ВИРУСНЫЙ ПЕРИТОНИТ КОШЕК

«Кишечный» коронавирус кошек (FCoV), о котором идёт речь в статье, имеет привязанность к эпителиальным клеткам кишечника и может размножаться только в них.

Существует очень похожий вирус FIPV - вирус инфекционного перитонита кошек/ФИП, который не привязан ни к какому органу, с током крови распространяется по всему организму и поражает все системы органов.

Эти два вируса чрезвычайно близки по антигенному составу, и существует вероятность того, что ФИП - это мутационная форма коронавируса. Принято считать, что под воздействием стресс-факторов коронавирус может мутировать в ФИП - это не доказано наверняка, но на сегодняшний день является основной теорией.

Коронавирус обычно протекает достаточно легко и не является заболеванием, угрожающим жизни животного, в то время как ФИП - тяжёлое, 100% смертельное состояние.

Очень важно понимать, что хотя коронавирус и ФИП, вероятно, имеют одного и того же возбудителя, это принципиально разные, ни в коем случае не тождественные заболевания .
Кошка с положительным анализом на коронавирус может никогда не заболеть перитонитом, в то время как у кошки с инфекционным перитонитом может быть отрицательный анализ кала на коронавирус.

ФИП развивается менее чем у 10% кошек, зараженных кишечным коронавирусом.

Если ваше животное погибло из-за инфекционного перитонита, выждите не менее 7 недель прежде чем приносить в этот же дом нового питомца.

ПРОГНОЗ ПРИ КОНТАКТЕ С КОРОНАВИРУСОМ

При контакте кошки с коронавирусом существуют 4 варианта развития событий:

1) У животного разовьется ФИП (как было сказано выше, это происходит менее чем у 10% зараженных).

2) Кошка некоторое время будет выделять коронавирус и вырабатывать антитела к нему, затем прекратит выделять вирус, и титр антител снизится вплоть до нуля. Примерно в половине всех случаев заражения выделение вируса длится в пределах месяца, и только 5% кошек выделяют вирус более 9 месяцев.

3) Кошка становится носителем коронавируса пожизненно (13% всех инфицированных кошек). Такие кошки постоянно выделяют FCoV в фекалиях, оставаясь заразными непрерывно. Большинство пожизненных носителей остаются клинически здоровыми, однако у некоторых проявляется хроническая диарея.

4) Кошка устойчива к вирусу - представляется, что около 4% кошек из всей популяции абсолютно устойчивы к коронавирусной инфекции.

СИМПТОМЫ КОРОНАВИРУСА

Коронавирусная инфекция у кошек чаще всего протекает без каких-либо жалоб, либо проявляется умеренно выраженными симптомами, такими как

Мягкий или жидкий стул,
- плохой аппетит,
- температура.

Как правило, эти симптомы не вызывают серьезного ухудшения общего состояния и не требуют медикаментозного лечения, если речь не идет о присоединении вторичной инфекции или сопутствующих заболеваниях.

Нередко от владельцев домашних животных можно услышать заключения: «А у нас коронавирус протекал тяжело, с некупируемой рвотой, лихорадкой, облысением и ампутацией правой тазовой конечности» (утрированно). Чаще всего это означает, что у пациента был(и) ещё диагноз(ы), который(е) не установили, но успешно списали всё на случайно пришедший в анализах положительный коронавирус.

Очень важно понимать , что если у котёнка жидкий стул и плохой аппетит, а также положительный анализ на коронавирус, то это вовсе не значит, что коронавирус является причиной симптомов болезни, он может просто тоже быть у животного, заодно, в то время как зверь страдает от инородного тела, застрявшего в кишечнике, например (или от любого из ещё 150 дифференциальных (возможных) диагнозов с такими распространёнными симптомами, как сниженный аппетит и диарея).
Именно поэтому, даже если вы знаете, что у питомца коронавирусный энтерит, никогда нельзя списывать на него появившиеся симптомы, при их появлении обязательно необходимо обратиться в ветеринарную клинику для диагностики.

ДИАГНОСТИКА КОРОНАВИРУСА

Коронавирус выделяется со стулом, поэтому наиболее чувствителен тест на определение вируса в фекалиях.

Однократное исследование малоинформативно, так как кошка может выделять вирус время от времени, не выделяя его в течение коротких промежутков времени вообще.
ПЦР-тест должен быть частью серии исследований, лучше всего делать его в сочетании с иммунофлюоресцентными анализами на антитела (в клинике вы чаще всего услышите словосочетание «титр антител», тут всё просто - при заражении и какое-то время после организм выделяет антитела, чтобы победить инфекцию, и антитела не выделяются, если им не с чем бороться).

Существуют разные мнения насчет того, как достоверно установить факт избавления кошки от инфекции - как правило, для этого требуется выполнение 5 последовательных исследований фекалий методом ПЦР с интервалом в 4 недели, и получить все результаты негативными. Согласно шведскому институту вирусологии, кошка считается не выделяющей коронавирус, если будут отрицательными 4 исследования фекалий методом ПЦР, сданные один за одним с промежутком 7–10 дней.

Уменьшение титра антител до уровня <10 по результатам анализа серологическим методом также указывает на выведение вируса из организма, снижение титра антител всегда наблюдается уже после того, как кошка перестала выделять вирус.

Для того, чтобы установить, что кошка является пожизненным носителем коронавируса, результаты анализов кала на FCoV должны оставаться положительными в течение как минимум восьми месяцев.

ПРОФИЛАКТИКА КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Перед тем как подселять новых животных в группу кошек, свободную от коронавируса, новичков необходимо обследовать и не вводить в прайд серопозитивных животных (серопозитивные - это кошки, у которых организм вырабатывает антитела против коронавируса, вырабатывает - значит знаком с ним, значит может быть инфицированным).

Карантин в отдельном помещении с отдельным лотком должен составлять 12 недель, после чего проводится повторный анализ. Только кошки с нулевым титром антител должны быть допущены в питомники, свободные от коронавируса.

Инфекция FCoV может быть естественным образом выведена из питомника, где обитает менее 10 животных, в то время, как если в одном помещении контактируют более 10 животных, спонтанное естественное выведение вируса очень маловероятно, так как происходит постоянная перекрестная передача возбудителя от одной кошки к другой.
В таких группах кошек необходимо провести тестирование и изолировать кошек с котятами на 12 недель. Ранний отъем (до 4 недель) и удаление котят на 12 недель от серопозитивных матерей способствует искоренению инфекции.
Все кошки, дающие положительную реакцию, должны быть удалены.

Если кошки содержатся в доме, необходимо обеспечить индивидуальный лоток для каждой кошки, в идеале - в разных комнатах. Лотки должны содержаться в чистоте, необходимо избегать остатков высохших фекалий, которые становятся летучими. Предпочтительно использовать закрытые лотки-домики и непылящий комкующийся наполнитель, чтобы минимизовать распространение микрочастиц фекалий.
Миски с кормом должны стоять как можно дальше от лотков с наполнителем.

ВАКЦИНАЦИЯ ОТ КОРОНАВИРУСА

Попыток разработать эффективную и безопасную вакцину от ФИП было предпринято множество, однако большинство из них были неудачными.
На сегодняшний день на рынке представлена интраназальная вакцина (спрей, впрыскиваемый в ротоглотку) от коронавируса кошек Primucell, Pfizer.

Вакцина изготовлена на основе температурно-зависимого штамма коронавируса, этот штамм способен к размножению только в ротоглотке, где более низкая температура, поэтому он вызывает местный иммунитет в воротах вхождения вируса, но продуцирует очень маленькое количество системных антител.

Данная вакцина эффективна против коронавируса и удовлетворяет требованиям безопасности, однако не получено убедительных доказательств в пользу ее эффективности от инфекционного перитонита, вызываемого коронавирусом. Кроме того, к моменту достижения возраста 16 недель (рекомендуемый срок первичной вакцинации) большинство кошек группы риска уже имели контакт с коронавирусом, а значит вакцинация не имеет смысла.

Кишечный коронавирус не является тяжелым заболеванием, поэтому вакцинация от него применяется редко, эффективность же от ФИП требует дальнейших исследований.
На 2014 год данная вакцина не включена в список рекомендуемых комитетом по вакцинации Всемирной ассоциации врачей по мелким домашним животным (WSAVA).

ЭЛИМИНАЦИЯ ВИРУСА (ВЫВЕДЕНИЕ ВИРУСА ИЗ ОРГАНИЗМА)

Вопросом скорейшим выздоровлением от коронавируса озабочены многие владельцы кошек и питомников. В интернете можно встретить самые фантастические многоступенчатые схемы выведения вируса, содержащие рекомендации по диете, курсам иммуномодуляторов из нескольких препаратов, витаминов, антиоксидантов, гомеопатических средств и т. п.
Как правило, авторы этих схем имеют отдаленное отношение к ветеринарии и еще более отдаленное - к принципам доказательной медицины.

Если речь не идет о бесконтрольном использовании набора иммуностимулирующих препаратов, любые действия владельца, направленные на «выздоровление» кошки не нанесут вреда животному, но едва ли повлияют на вирус.
Необходимо понимать, что рано или поздно абсолютное большинство кошек самостоятельно избавляются от вируса (в противном случае, смертность была бы очень высокой).

Важно понимать :
вероятно, практически безобидный кишечный коронавирус мутирует в смертельный неизлечимый ФИП при стрессе. Следовательно, чем меньше стресса, чем меньше населенность кошачьей популяции - тем больше шансов что при инфицированности коронавирусом ФИП не выработается.
Чем больше владельцы начинают экспериментировать, «лечить» и «выводить» вирус, особенно если это связано с принудительным введением каких-либо препаратов (обкалыванием кота иммуномодуляторами и запихиванием насильно в пасть горсти таблеток ежедневно длительное время) - тем больше стресса они вызывают у животного и тем самым сами повышают вероятность развития ФИП у своего животного!

Для кошек - носителей коронавируса наибольшая вероятность развития ФИП существует в возрасте до года (по некоторым данным до 3-х лет), поэтому если у вашей кошки приходит положительный анализ на коронавирус в более позднем возрасте, маловероятно, что у нее возникнет ФИП.

Меры, которые могут способствовать выведению коронавируса из организма или по крайней мере бессимптомному перенесению заболевания:

Хороший уход, поддержание высокого уровня гигиены;

Полноценное сбалансированное кормление высокобелковым рационом.

Существует мнение, что закисление среды желудочно-кишечного тракта, что достигается, прежде всего кормлением сырыми мясом/рыбой, может способствовать победе над коронавирусом, однако это не подтверждается никакими объемными исследованиями, кроме того, кормление сырым рационом закономерно повышает риск получения гельминтозов, токсоплазмоза и т. д.;

Антиоксиданты, такие как витамины A, C и E и цинк, возможно, оказывают противовирусное и/или иммуностимулирующее действие.

Все витаминные препараты можно применять только под контролем ветеринарного врача.
Нет необходимости продолжать использовать антиоксиданты дольше, чем несколько месяцев после того, как у кошки был риск заражения коронавирусом FCoV, более того, это может быть вредно.

ОСОБЫЙ УХОД

Так как очень вероятно, что мутацию коронавируса в FIP провоцируют различные стресс-факторы, то после рекомендации ветеринарного врача избегать стрессовых ситуаций для животного, многие владельцы начинают содержать зверя как инвалида, который в любой момент может умереть - не дают ему препараты от блох и глистов, не вакцинируют животное, отказываются от кастрации и от других операций, даже при наличии показаний, не посещают планово ветеринарного врача.

При отсутствии образования ветеринарного врача поведенческой медицины, для большинства владельцев «стресс» - вообще очень субъективное понятие, и полностью оградить своего питомца от стрессов мы не можем никогда, потому что для разных особей разные ситуации волнительны: для одной кошки стресс - прогулка вне дома, для другой кошки стресс - отсутствие прогулки вне дома, для одного животного не будет стрессом работающий рядом пылесос, другое животное страдает даже если в миске закончилась вода.

Что касается вакцинации и хирургических операций для животных с положительным анализом на коронавирус:
вакцинируют и планово оперируют только клинически здоровых животных, то есть, если у животного нет внешних признаков заболевания (повышенной температуры, рвоты, диареи, сниженного аппетита, истощения, обезвоживания, выделений из разных мест и т. д.) - его обязательно вакцинируют и его можно оперировать, даже если оно является носителем коронавируса.
Нет никаких данных за то, что данные процедуры повлияют на течение заболевания самим коронавирусом или его мутации в ФИП.

Если у животного с коронавирусным энтеритом есть симптомы заболеваний, то его лечат симптоматически и потом вакцинируют/при необходимости оперируют.

Если животное не страдает от неутолимого полового влечения и кастрация планируется планово, а не как избавление от мучений, то имеет смысл подождать. Скорее всего коронавирус в течение нескольких месяцев естественным путем покинет организм животного.

На этом всё. О вирусном перитоните кошек (ФИП) можно рассказать больше, но в рамках отдельной статьи, так как это два разных заболевания.

Если у вас остались вопросы, не стесняйтесь задавать их в комментариях к статье.

Коронавирусные инфекции кошек и собак вызываются представителями рода Coronavirus (семейство Coronaviridae). Основным проявлением коронавирусной инфекции у собак является диарея. V кошек коронавирусы вызывают энтериты и инфекционный перитонит, широко распространенные среди диких и домашних кошек.

Возбудителем коронавирусной инфекции у собак является Canine coronavirus, вызывающий острый коронавирусный энтерит. Заболевание передается при непосредственном контакте с носителем вируса (через слюну и фекалии). Данной инфекции подвержены собаки любого возраста, однако чаще всего поражаются щенки и ослабленные животные, которые уже перенесли другую болезнь, например парвовирусную инфекцию.

Основные симптомы заболевания - рвота и диарея, иногда с примесью крови, обезвоживание организма, потеря в весе, апатия. Через 3-4 недели после выздоровления может развиться повторное заболевание. При проведении диагностики коронавирусный энтерит собак необходимо дифференцировать от парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции кишечного типа и чумы плотоядных.

Коронавирусы, поражающие кошек, представлены двумя биотипами: FECV, или коронавирус энтерита кошек, и FIPV - вирус инфекционного перитонита кошек (2, 3). Носителями FECV является 16-50% домашних кошек, у которых вирус локализуется в тонком кишечнике, не вызывая заболевания или становясь причиной легкой диареи. В то же время у 5-12% носителей может наблюдаться мутация условно-патогенной кишечной формы FECV в патогенную (FIPV), что приводит к развитию болезни (2).

Инфекционный перитонит (ИП, FIP) кошек, заканчивающийся, как правило, летально, протекает в двух формах - влажной и сухой. Влажная (экссудативная) форма ИП характеризуется поражением кровеносных сосудов брюшной или грудной полостей, сопровождающимся выпотеванием плазмы в указанные полости (рис. 1). У больных животных, развивается асцит (рис. 2), а в случае скопления жидкости - нарушение функции дыхания. На серозных покровах органов брюшной полости формируются фибринозные наложения (рис. 3), в дальнейшем могут образовываться спайки. Вследствие нарушения функции печени наблюдается эктеричность склер и кожных покровов.

Сухая (неэкссудативная) форма ИП протекает без скопления жидкости в брюшной и грудной полостях. В этом случае страдают внутренние органы - головной мозг (рис. 4), печень, почки, поджелудочная железа, в 25% случаев наблюдаются поражения глаз (рис. 5) (5).

Поскольку эффективная схема лечения ИП пока не разработана, первостепенное значение имеют профилактические меры, направленные на раннее выявление вирусоносительства (1, 3).

Диагностика инфекционного перитонита кошек также представляет серьезную проблему. Традиционные методы выявления возбудителя, основанные на обнаружении антител к коронавирусам (РНГАи ИФА), дают до 60% ложноположительных результатов. Это обусловлено присутствием в кишечнике кошек условно-патогенных штаммов возбудителя (2, 3). В ряде зарубежных лабораторий применяется комплексная методика диагностики ИП, включающая определение:
- титра антител к коронавирусу;
- соотношения альбуминов/глобулинов в транссудате или плазме крови;
- уровня а-1 кислого гликопро-теина (AGP);
- цитологических и гематологических показателей (4).

Материалы и методы
В исследовании был использован штамм коронавируса «Багира» (5 1оg ТЦД50/мл) в разведениях, 8 изолятов коронавирусов кошек (FCoV), 2 изолята коронавируса собак (CCV) и суспензии вируса панлейкопении кошек и калицивируса кошек.
При испытании ПЦР-тест-системы использовался биологический материал здоровых кошек, животных с клиническими признаками ИП и кошек с неспецифическими симптомами. Среди исследованных животных были как содержащиеся в питомниках, так и находящиеся на индивидуальном содержании.
Биологический материал параллельно исследовался методами ПЦР и РИГА. С помощью ПЦР-системы исследовались фекалии, плазма крови, транссудат при специфическом асците, а методом РИГА - сыворотка крови и транссудат.

Серологические тесты проводились с использованием набора для выявления антител к коронавирусам плотоядных в РИГА (ТУ 9388-025-00494189-01). Биологический материал собак исследовался методом ПЦР.

Однако данное исследование требует значительных затрат времени и средств. В связи с этим эффективным методом диагностики ИП может служить полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет не только выявлять коронавирусы кошек, но и проводить дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов исходя из различной локализации их в организме. При этом обнаружение вируса в фекалиях кошек свидетельствует о носительстве условно-патогенных штаммов (FECV), а в плазме крови или асцитной жидкости - о циркуляции в организме животного патогенных штаммов (FIPV) и, следовательно, о заболевании.

Цель настоящего исследования - испытание тест-системы для диагностики коронавирусной инфекции у кошек и собак на основе ПЦР.

Выделение РНК проводилось с использованием набора «РНК-сорб» (ЦНИИЭ), в основе которого лежит метод ее сорбции на силикагеле. ПЦР проводилась на амплификаторе ТЕРЦИК («ДНК-технология») по стандартной методике. Полученные ПЦР-продукты визуализировались методом электрофореза в 1,5% агарозном геле, содержащем бромистый этидий.

Результаты и обсуждение
В процессе исследования проведен анализ сведений о нуклеотидных последовательностях представителей семейства Coronaviridae, в частности различных изолятов коронавирусов кошек и собак, опубликованных в базах данных Entrez, GeneBank, EMBL и DDBJ. Кроме того, изучена литература, характеризующая структуру геномов FCoV, CCV и их генетическое родство с другими представителями семейства.

В качестве мишеней для специфических праймеров были выбраны две консервативные последовательности в гене нуклеокапсидного протеина. Специфичность предложенных праймеров изучалась с помощью компьютерных программ FASTA и BLASTA. В результате проведенной работы была выявлена гомология выбранных олигонуклеотидов только с генами нуклеокапсидного протеина FCoV и CCV и не обнаружено их значимой гомологии с нуклеотидными последовательностями иных видов семейства Coronaviridae, а также каких-либо других вирусов, бактерий или эукариот. Таким образом, предложенные праймеры, исходя из теоретических расчетов, должны обладать 100% специфичностью.

На следующем этапе исследования были оптимизированы условия выделения РНК вируса и проведения реакции обратной транскрипции и ПЦР, а также определены специфичность и чувствительность ПЦР-анализа. Размер ПЦР-продукта составил 350 пар нуклеотидов. Метод показал 100% специфичность и высокую чувствительность. Обнаружение коронавируса в фекалиях кошек свидетельствовало о носительстве его условно-патогенных штаммов в кишечнике, обнаружение FECV в транссудате и плазме крови - о развитии заболевания.

При исследовании методом РНГА положительным результатом считалось обнаружение у животного титра антител > 1:128. Однако это могло указывать как на вирусоносительство, так и на манифестированную форму инфекции. Кроме того, положительный титр мог быть обусловлен наличием контакта с коронавирусом ранее. В качестве материала от собак исследовались фекалии, и обнаружение в них РНК коронавируса свидетельствовало о заболевании, вызванном CCV.

В ходе эксперимента был исследован биологический материал, взятый у 193 кошек (таблица). Методом РНГА положительный результат был зафиксирован у 131 животного (титры антител > 1:128). При тестировании «сероположительных» кошек методом ПЦР РНК коронавируса была обнаружена в плазме и асцитной жидкости у 12 животных (9%), только в фекалиях - у 68 (52%) и у 51 (39%) - не обнаружена вовсе. Таким образом, 52% кошек с серопозитивным результатом являлись носителями условно-патогенных штаммов коронавируса, а 39% были здоровы. Очевидно, что исследование методом РНГА дало 63% ложноположительньгх результатов (в пересчете на общее количество исследованных животных).

Заключение
Полученные результаты свидетельствуют о том, что диагностика коронавирусной инфекции кошек традиционным серологическим методом (РНГА) дает более 60% ложноположительных результатов, поскольку не позволяет дифференцировать состояние носительства от истинного заболевания. Кроме того, "сероположительными» считались животные, имевшие контакт с коронавирусом ранее.

Использование метода ПЦР позволило провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в связи с их раз личной локализацией в организме и отличить состояние носительства от заболевания. Таким образом, данные проведенного исследования говорят о целесообразности использования метода ПЦР для выявления коронавирусов кошек и собак и постановки окончательного диагноза.

В соответствии с приказом № 45 Департамента ветеринарии МСХ РФ в период с 03.08.2004 г. по 06.08.2004 г. были проведены комиссионные испытания тест-системы для диагностики инфекционного перитонита кошек методом ПЦР. Тест-система успешно прошла комиссионную апробацию, показав 100% специфичность и высокую чувствительность в рамках предложенной панели. В настоящее время тест-система «Коронавир» для выявления и идентификации коронавирусов кошек и собак, основанная на ПЦР, успешно используется в ветеринарной практике (ТУ 9388-142-00494189-05; РУ № Р077-1-3.5-0813 зарегистрирована в РФ за № ПВР-1-3.5/01556 от 30.06.06 г. сроком на 5 лет).

ЛИТЕРАТУРА
1, Addie, D, D„ Jarrett, 0. Use of a reverse- transcriptase polymerase chain reaction for monitoring the shedding of feline coronavirus by healthy cats, Vet. Rec, 2001, May 26; 148 (21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Feline Infectious Peritonitis Viruses Arise by Mutation from Endemic Feline Enteric Coronaviruses, Virology, 1998:150-157.
3, Herrewegh, A.A., Mahler, M„ Hedrich, H.J., Haagmans, B.L Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R,J, Persistence and evolution of feline coronavirus in a closed cat-breeding colony Virology 1997, Aug 4; 234 (2): 349-363,
4, Comparison of Different Tests to Diagnose Feline Infectious Peritonitis; Katrin Hartmann at al„ 2003.
5, Feline infectious peritonitis; Stacy E, Andrew, Veterinary clinics of North America: small animal; vol. 30, number 5, September 2000

Е.А. ЯРАЛОВА, И.Л. ОБУХОВ, ММ РАХМАНИНА, Э.И. ЭЛИЗБАРАШВИЛИ, В.И.УЛАСОВ,
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, г. Москва

Современная ветеринария активно применяет на практике все передовые научные достижения. Это помогает добиться высоких результатов в диагностике инфекционных заболеваний у животных. Например, сегодня уже просто невозможно обойтись без такого передового метода, как ПЦР (полимеразная цепная реакция). Данная методика позволяет безошибочно выявить возбудителей целого ряда инфекций, которыми страдают кошки. Причем поставить диагноз в большинстве случаев удается на самых ранних этапах патологического процесса. получить результат этого высокоточного тестирования можно всего через несколько часов после взятия пробы.

Зачем проводится такая диагностика

Чтобы понять, чем отличается ПЦР диагностика кошек, надо иметь представление об инфекциях, которые чаще всего поражают этих животных.

Среди всех патологий, вызываемых вирусами, чаще всего ветеринары сталкиваются со следующими болезнями:

• Вирусным иммунодефицитом
• Лейкозом, развитие которого провоцирует вирус
• Инфекционным перитонитом

Эти три заболевания считаются неизлечимыми, и нередко они приводят к смерти животного.

Но благодаря внедрению ПЦР-диагностики многим питомцам удалось продлить жизнь. И даже в случае обнаружения возбудителя одной из этих инфекций при правильной программе лечения животное может вести активный образ жизни, радуя своего владельца.

Что представляет собой данный метод исследования

ПЦР - диагностика является молекулярным методом выявления инфекций. Его специфические особенности позволяют обнаруживать в биологическом материале даже единичных представителей патогенной флоры. Данная методика появилась в конце прошлого века, а точнее - в 1983 году. Ее автор американский химик К. Мюллис за свою разработку был удостоен Нобелевской премии.

Анализ ПЦР состоит из трех этапов:

• Сначала обрабатывается материал, подлежащий исследованию
• Затем из него выделяется наследственная основа (РНК, ДНК)
• Последняя фаза заключается в проведении амплификации (умножение выделенных участков ДНК)

Стоит заметить, что достоверный результат можно получить только в том случае, когда материал животного берется при соблюдении всех правил.

Какие материалы берутся на анализ

При проведении ПЦР диагностики кошек можно брать на анализ абсолютно любой материал:

• Каловые массы.
• Мочу.
• Слизистые выделения.
• Фрагменты пораженных органов и прочие биологические субстанции. Забор материала производится в специальные контейнеры, а затем направляются в лабораторию на исследование.

Когда необходима ПЦР-диагностика

Данный вид исследования сегодня просто незаменим. Его возможности трудно переоценить, особенно в тех случаях, когда речь идет об инфекционном перитоните кошек. Это заболевание считается самым распространенным и коварным. Вот почему диагностика с применением метода ПЦР получила такое широкое распространение в ветеринарной практике. Тест на наличие инфекционных возбудителей этим методом следует проводить всем кошкам, которые регулярно бывают на улице.

Поскольку наша лаборатория располагает всем необходимым для проведения этого высокочувствительного теста, что позволяет проводить качественную диагностику. Если своевременно выявить источник болезни, можно составить адекватную для конкретной кошки программу терапии и профилактические мероприятия.

С каждым годом, благодаря научному прогрессу, появляются новые, современные методики и диагностики заболеваний животных. Сейчас, практически в любой ветеринарной клинике, проводится ПЦР диагностика инфекций любых домашних животных. В клинике «Лапки-царапки» имеется специальная лаборатория, в которой можно провести различного рода анализы.

Благодаря этим инновационным разработкам мы можем своевременно правильно диагностировать любые инфекционные заболевания домашних любимцев. Особенно это важно при серьезных заболеваниях, которые необходимо выявлять на ранних стадиях и которые не всегда можно определить при других клинических анализах или УЗИ. П олимеразная цепная реакция (ПЦР) является незаменимым методом диагностики для проведения важных ветеринарных исследований, и используется параллельно с бактериологическим и иммунохимическим методами.

При клинике «Лапки-царапки» находится специальная лаборатория ПЦР диагностики инфекций животных. Мы оказываем услуги по Ленинградской области и Санкт-Петербургу. Отличительная особенность наших услуг - заборы проб у вас на дому и бесплатная курьерская служба.

ПЦР диагностика инфекций - это самый точный, современный, быстрый способ исследования в ветеринарной вирусологии и микробиологии, позволяющий не только выявить заболевания, но и определить РНК, ДНК вируса и антитела к нему.

Преимущества ПЦР диагностики:

Возможность выявить инфекцию в случаях, когда другими методами это определить невозможно

Скорость исследования, которая объясняется тем, что не требуется длительное время выращивать и определять возбудителей

Процесс полностью автоматизированный и стандартизированный, что исключает даже малейшие ошибки, в отличие от ручных исследований

Результат исследований готов в течение 12 часов

Диагностика - универсальна, так как помогает определить возбудителей в различных жидкостях и биологических тканях

Огромное значение ПЦР диагностика животных имеет на ранних стадиях таких заболеваний, как бруцеллез, хламидиоз, лейкоз, лептоспироз, листериоз и многих других. Использование этого метода дало возможности разработать уникальные программы по успешному оздоровлению большинства инфекционных и вирусных заболеваний домашних животных.

Воспользуйтесь этим уникальным методом диагностики, если хотите, чтобы ваш домашний любимец был здоров и радовал вас долгие годы! ПЦР диагностика инфекций часто является единственным шансом для спасения жизни! По любым возникшим у вас вопросам, вам подробно ответят специалисты клиники «Лапки-царапки» в онлайн-режиме или по телефонам. Обращайтесь, мы всегда придем на помощь к вашим питомцам!